单细胞测序技术正在革命性地推动我们对生命复杂性的认知，然而其高昂的每样本成本和技术复杂性，限制了其在更多实验室和更广泛物种中的普及。尽管多重样本标记技术能有效“降本增效”，但现有的方法往往受限于免疫抗体动物群特异形、寡核苷酸绘制料工费高亢或进行操作具体流程繁杂。近日，南方海洋科学与工程广东实验室（广州）的陈凯老师开发团队在Journal of Genetics and Genomics上发表了一项创新性方法学研究，提出了一种名为HEATag的新型样本标记策略，为我们提供了一个成本低预算、跨种群、全app平台兼容的全新解决方案。

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Journal of Genetics and Genomics (JGG)是由华人地理学职业技术技术学校隔代基因显性基因规律与发育状况微物理学探讨所和华人隔代基因显性基因规律掌握举办单位的国家科研杂志论文学术刊物，秉承于报到人身安全地理学学和临床医学隔代基因显性基因规律学范围的原创文章性探讨成功。JGG 202几年度会影响要素7.1，Scopus科研杂志论文学术刊物评判标准CiteScore 9.9，居首JCR 202几年度GENETICS & HEREDITY范围Q1区(Top 10%)，BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY范围Q1区，居首华人地理学职业技术技术学校杂志论文学术刊物分离微物理学种类别1区(Top杂志论文学术刊物)，隔代基因显性基因规律学和生化学与氧分子微物理学小类双1区。

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哪种是HEATag

巧设的“二一体化”设汁

HEATag是由凝集素和HUH内切酶组成部分的相结合蛋清

「手机定位器」引擎 - 凝集素

能够识别细胞膜上广泛存在且高度保守的糖基化绘制（如GlcNAc和Neu5Ac）。

「连接方式器」传感器 - HUH内切酶

可以序列特异性地与普通的、无需化学修饰的单链DNA（ssDNA）检索条型码实现共价拼接。

“1+1>2”的体验：将两者融合，得到的HEATag蛋白既能通过凝集素牢牢锚定在细胞膜上，又能通过HUH蛋白携带特定的DNA条形码进行样本量图标与追溯。

Fig1: HEATag几吨标示操作过程展示图

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实战技巧验测

HEATag又有可以打？

需要在与众不同标准下，达到母乳喂养昆虫生殖血细胞系单生殖血细胞混样测序

实验室里的设计再精妙，也要经过真实样本的 “实战考验” 才算数。研究探讨的团队为 HEATag 設置了多轮 “学习压力软件测试”，从肿瘤细胞系系到肿瘤细胞系核，从普通到地温，从新鲜样板到确定样板，全地方验证通过它的保持稳判定和可信性。

第二轮测试图片采取哺乳期间爬行动物癌受损内部系：探讨师考虑了位于人、鼠、仓鼠几个鱼类的五种癌受损内部（HEK293T、K562、MEF、CHO），在室内温度下使用 HEATag 图标后混和测序。不可能回收并的 11447 个癌受损内部中，85.66% 都能能够 HEATag 方形码精确度共同到原鱼类，子样本间是交叉生态破坏较少，UMAP 聚类分享分享更简单证明信，HEATag 方形码与鱼类特男人什么是基因组共同点长度共同。 又，检查环境进三步晋升：深入分析成员常试在 4℃下标签设计剥好血组织组织膜、在恒温下标签设计甲醇确定血组织组织膜，也会标签设计血组织组织膜核。后果已然闪亮：那些环境下，样表标签设计与种群产品信息均有着有效的涉及到的性，分拆精确度率超 95%。即使甲醇确定会导致轻微的的转录本相互的污染，血组织组织膜核提纯就会有少量的 RNA 泄露，血组织组织膜类别的引用后果已然与剥好样表控制有差异 ，证件 HEATag 需要标签设计有差异 清理环境下的实验室样表。

Fig2: HEATag 可在的不同前提条件下做好单体细胞转录组混样剖析

够标签喂奶植物和海域无脊椎神经植物的原代神经细胞

若说内部系测试方法是 “地基题”，那团队样板还是 “附带题”， 这部分样板一般情况下因内部形式非常复杂、氛围适应环境性非常规，称得上标记图片的技术的 “困惑”，而 HEATag 恰恰恰在这部分 “困惑” 上展示出了优质。

研究团队选择了大鼠和小鼠的睾丸安排，这类样本包含精原干细胞、精母细胞、精子细胞等多种类型，对标记一致性的要求极高。实验中，两种动物的睾丸用特异性 HEATag 条形码标记后混合测序，最终获得的 14663 个细胞这样不仅能被更准分清，其他注意细胞核型的聚类分析毕竟都明了可辨。

更令人惊喜的是HEATag对海域生物工程的支持性。HEATag能在海水的等渗溶液中标记新鲜的海洋动物细胞（如海月水母、大西洋海刺水母）。研究人员用人工海水稀释的HEATag 标记了水母和珊瑚的组织细胞后在 BD Rhapsody 平台测序，最终回收的 6452 个细胞中，HEATag 条状码与种群转录组兼备较高完整性性，没能现身因高盐条件影响的 “标出就失效”。后续对甲醇固定的海洋生物细胞测试结果显示，HEATag 在固定样本中的拆分效果优于新鲜样本。

Fig3: HEATag 可改变哺乳期生物安排样表多个 scRNA-seq 分析一下

Fig4: HEATag可确保清新大海无脊柱两栖动物多沉 scRNA-seq 分析一下

HEATag与组织的依照并不会进而引发转录组的相关性该变

对样本标记技术来说，“不影响样本本身的 RNA 特征” 是底线。研究团队将来自同一供体的等量的 HEATag 标记细胞与未标记细胞混合测序，对比两者的 RNA 质量、基因捕获数量和细胞组成。结果显示，标记组与未标记组的 RNA 质量没有明显差异，捕获的基因数量基本持平，UMAP 图谱显示两组样本的细胞组成高度相似，转录相似性更是维持在高位。无论是细胞簇的注释结果，还是不同细胞类型的基因回收数量，两组都几乎一致，没有出现 “标记导致的基因表达异常”。这意味着，HEATag在结束标示工作的同样，也不会对后继的转录混合物析致使电磁波辐射，做到了钻研数据分析的实在性。

Fig5: HEATag是不会影晌样板的 RNA 表达出模式，

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未来的发展可期

HEATag 能为单人体细胞分析产生怎样的？

HEATag 的作用，远不是于 “解决处理标上故障 ”，它的迟钝性和普遍意义，在为单组织设计打开网页比较多几率

从技术应用场面来

HEATag 能履盖从 “简短较为进行分析”（如癌专业团体结构化与正常的专业团体结构化、口服药物进行处理与相较比较）到 “大数量研发”（如专业团体结构化人体生殖细胞图谱绘出、高通骁龙量筛分）的全区间诉求。发生变化 PIP-seq、Stereo-cell 等新式的可优化科技的经济发展，HEATag 还能进一部不断提升单人体生殖细胞研发的通量，帮助科学研究专业团体抓好很大数量的该项目。

从跨范畴有潜力来瞧

HEATag 实际上使用到转录组学，还能与表观染色体组学、球营养物质组学、区域组学等水平工艺构建，利用自定义指数和寡核苷酸字段，HEATag 可不会快速带入与众不同的组学流程图，不影向数字信号猎取深度.。另外，依据HEATag还可不会快速发展单受损细胞糖组学科学研究水平工艺。

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媒体合作动态展示

拜谱动物与陈凯教受确立分式的运算合作方式合作意愿

应当瞩目的是，在 HEATag 水平体出现巨形运用空间的背静下，拜谱菌物制品学已与我国南方海洋菌物资源测试与建设工程江西测试室（佛山）陈凯专家教授确立进行初步加盟是否合作。交易双方彼此设计重点围绕 HEATag 水平的服务业化出台、教育成果转化开发转变等方法伸展进一步操作，促进相应低的成本、跨鱼类的单受损上皮细胞系标注水平最快运用于现场教育成果转化开发情况，为大量测试室出示极有效率、经济条件的单受损上皮细胞系探索机器，转向教育成果转化开发操小说作家在受损上皮细胞系菌物制品学学、海洋菌物资源菌物制品学学、妇科疾病措施等行业领域作为大量进阶